Резистентность эритроцитов Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в клинике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85 %) раствора хлорида натрия (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора хлорида натрия, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона

Принцип

Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах хлорида натрия.

Нормальные величины

У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации хлорида натрия 0,50-0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40-0,35 %-ном растворе хлорида натрия.

Клиническое значение

Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70-0,75 %) наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий, возможно при механической желтухе.

Пробы на ферментопатию эритроцитов В эритроцитах протекают различные метаболические процессы: гликолиз, пентозофосфатный путь окисления глюкозы, восстановление глутатиона, разрушение перекиси водорода и другие реакции метаболизма. Нарушения этих процессов могут быть связаны с наследственными дефектами синтеза ферментов (энзимопатии). Наиболее распространенной ферментопатией эритроцитов является нарушение синтеза глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) – ключевого фермента пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Существует обратное соотношение между активностью Г-6-ФДГ и резистентностью эритроцитов, поэтому дефицит Г-6-ФДГ в клетке может приводить к гемолизу эритроцитов (гемолитический криз) при приеме пациентами ряда препаратов, действующих как оксиданты, – противомалярийных средств (примахин), ацетилсалициловой кислоты, сульфаниламидов, нитрофуранов, 5-НОК, ПАСК, фенацитина и др. Для диагностики дефицита Г-6-ФДГ применяются как качественные методики, так и количественные определения ее активности в эритроцитах.

Тест на образование телец Гейнца – Эрлиха

Нормальные величины

У здоровых людей в эритроцитах наблюдается образование единичных телец красного цвета. Небольшое количество телец Гейнца обнаруживают в клетках новорожденных или больных после спленэктомии.

Клиническое значение

В эритроцитах с дефицитом Г-6-ФДГ обнаруживается 4–6 телец. Проба неспецифична, поскольку тельца Гейнца появляются в эритроцитах при передозировке сульфаниламидных препаратов, отравлениях анилиновыми красителями, дефиците других ферментов (глутатион-редуктазы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы), у носителей нестабильных гемоглобинов.

Качественная методика Мотульского – Кемпбеля

Нормальные величины

У здоровых людей смесь обесцвечивается через 40–55 мин.

Клиническое значение

Замедление времени обесцвечивания смеси более 90 мин свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. При гемолитической энзимодефицитной анемии обесцвечивание наступает через 3-24 ч.

Качественная методика по Бернштейну

Нормальные величины

У здоровых людей обесцвечивание смеси происходит через 15–20 мин.

Клиническое значение

Удлинение времени обесцвечивания свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. Неполное обесцвечивание за 30 мин соответствует незначительному уменьшению активности фермента, а отсутствие обесцвечивания к этому времени – резкому ее снижению.

Цитохимические исследования эритроцитов

Цитохимические методы исследования основаны на химических реакциях, позволяющих обнаружить в клетках полисахариды, липиды, нуклеиновые кислоты, ферменты и другие соединения. Цитохимические исследования обычно отличаются простотой, не требуют специального оборудования и дают ориентировочное представление о количестве определяемого вещества. При цитохимическом исследовании чаще всего пользуются полуколичественной оценкой результатов, основанной на степени интенсивности специфической окраски.

В зависимости от нее делят все элементы на 4 степени:

1) отрицательные, т. е. неокрашенные (—);

2) слабо положительные (+);

3) положительные (++);

4) резко положительные (+++).

Цитохимические исследования эритроцитов проводят с целью выявления различных внутриклеточных включений, наличия разных форм гемоглобина, ферментных нарушений.

Определение негемоглобинового железа

Сидероциты и сидеробласты – это эритроциты и эритробласты (нормобласты), содержащие в цитоплазме негемоглобиновое железо в виде гемосидерина и ферритина.

Нормальные величины

В периферической крови число сидероцитов не превышает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 ± 0,04 %; в костном мозге их несколько больше – 0,2–2,1 %; количество сидеробластов (ядерных эритроцитов с железосодержащими гранулами) в костном мозге – 23,7 ± 2,4 %.

Клиническое значение

Снижение сидероцитов и сидеробластов характерно для железо дефицитных анемий. Повышение железосодержащих клеток наблюдается при гемолитических анемиях, после спленэктомий, при миелодиспластическом синдроме (рефрактерной сидеробластной анемии), эритромиелозе.

Методика определения фетального гемоглобина по Бетке

Нормальные величины

У взрослых встречаются единичные окрашенные эритроциты (содержащие гемоглобин F); увеличение числа окрашенных эритроцитов наблюдается у новорожденных и детей до 5-месячного возраста.

Клиническое значение

Увеличение числа эритроцитов с HbF наблюдается у больных гомозиготной талассемией (до 5 %), серповидноклеточной анемией (1-30 %). До 10 % HbF можно обнаружить при пароксизмальной ночной гемоглобинурии, рефрактерной сидеробластной анемии, острых лейкозах, врожденном хроническом миелолейкозе. Снижение HbF наблюдается при гемолитической анемии новорожденных.

Активность Г-6-ФДГ (К.Ф.1.1.1.49)

Нормальные величины

В эритроцитах здоровых людей обнаруживают 10–20 гранул формазана.