Подсчет лейкоцитов под микроскопом в определенном числе квадратов счетной камеры и расчет их количества в 1 л крови с учетом разведения крови и объема счетной камеры.

Реактив

3-5%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный для окраски ядер лейкоцитов несколькими каплями раствора метиленового синего. Раствор имеет голубой цвет, может длительно храниться.

Ход определения

В сухую пробирку наливают 0,4 мл реактива 1. Из пальца набирают 0,02 мл крови (можно использовать стабилизированную антикоагулянтом венозную кровь). Вытирают кончик пипетки, затем выдувают из нее кровь на дно пробирки, перемешивают, повторно набирая и выдувая смесь крови и реактива (пипетируя), маркируют пробирку и оставляют ее до момента счета. Хранить смесь крови с раствором уксусной кислоты рекомендуется не более 2–4 ч.

Кровь, разведенную в пробирке уксусной кислотой, тщательно перемешивают и заполняют ею счетную камеру. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания лейкоцитов. Не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и при малом увеличении (окуляр 10х, объектив 8х) подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах. Лейкоциты считают по всей сетке в больших квадратах, не разделенных на малые квадраты и полосы, начиная с верхнего левого угла сетки. Для лучшего контрастирования затемняют поле зрения, опуская конденсор и закрывая диафрагму. Считают клетки, расположенные внутри квадрата и лежащие на любых двух линиях, чтобы дважды не подсчитывать одну и ту же клетку.

Расчет числа лейкоцитов проводят исходя из разведения крови (20), числа сосчитанных квадратов (100) и объема одного большого квадрата 1/250, так как сторона квадрата 1/5 мм, высота 1/10 мм:

X = (а х 250 х 20) / 100,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах;

20 – разведение крови;

100 – число больших квадратов;

250 – коэффициент пересчета на 1 мкл, так как объем одного большого квадрата равен 1/250 мкл.

Практически для расчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови их число в 100 больших квадратах умножают на 50, а в 1 л – полученную величину умножают на 106.

X = a x 50,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах.

Примечание. При подсчете лейкоцитов неизбежна ошибка в 6–8 % случаев.

Причины ошибок

При большом количестве нормоцитов в периферической крови их засчитывают в число лейкоцитов (и лейкоциты, и нормоциты – ядросодержащие клетки). Для того чтобы правильно установить количество лейкоцитов, надо из общего числа ядросодержащих клеток крови вычесть количество нормоцитов.

Остальные причины ошибок аналогичны тем, которые возникают при подсчете в счетной камере количества эритроцитов.

Унифицированная методика подсчета лейкоцитов в гематологическом анализаторе

Принцип

Большинство счетчиков основано на кондуктометрическом методе. Клетки, находящиеся в растворе электролита, проходя через электрическое поле, изменяют сопротивление электрической цепи. Возникший импульс регистрируется счетным устройством с цифровой индикацией.

Кровь предварительно разводят и смешивают с каким-либо лизирующим эритроциты реактивом, например раствором уксусной кислоты или сапонином.

Специальное оборудование

Гематологический анализатор.

Реактивы и ход определения

Реактивы и ход определения – по инструкции, прилагаемой к прибору фирмой-производителем.

Нормативные величины

Количество лейкоцитов в зависимости от возраста: при рождении – 9,0–3,0 Г/л; 1 месяц – 5,0-19,6 Г/л; 1–3 года – 6,0-17,5 Г/л; 4–7 лет – 5,5-15,5 Г/л; взрослые – 4,0–9,0 Г/л.

Клиническое значение

В основе повышения количества лейкоцитов (лейкоцитоза) могут лежать различные патофизиологические механизмы, связанные с увеличением продукции, повышенной мобилизацией костномозгового резерва, а также перераспределением пристеночного пула. Перераспределенный лейкоцитоз обусловлен тем, что в сосудистом русле существует два пула лейкоцитов: пристеночный, или маргинальный, и циркулирующий. В связи с этим лейкоцитоз может развиваться вследствие поступления лейкоцитов из пристеночного пула или из органов, служащих для них депо. Это часто наблюдается при различных физиологических состояниях (физиологический лейкоцитоз):

1) физический лейкоцитоз (миогенные нагрузки);

2) пищеварительный лейкоцитоз (через 2–3 ч после приема пищи, особенно богатой белком);

3) беременность (особенно вторая половина);

4) эмоциональный стресс;

5) введение некоторых лекарственных препаратов (адреналин, кортикостероиды);

6) воздействие рентгеновских лучей и после физиотерапевтических процедур.

Наиболее частые причины патологического лейкоцитоза:

1) большинство острых инфекционных заболеваний (кроме брюшного тифа, бруцеллеза и вирусных инфекций);

2) воспалительные заболевания (крупозная пневмония, тонзиллит, экссудативный плеврит, перикардит);

3) инфаркты различных органов (миокарда, селезенки, легких);

4) гнойные процессы (сепсис, рожистое воспаление, менингит, аппендицит, перитонит, эмпиема плевры);

5) обширные ожоги (лейкоцитоз вызывается всасыванием продуктов тканевого распада и присоединением вторичной инфекции);

6) интоксикации;

7) уремия;

8) диабетическая кома;

9) шок;

10) острые кровопотери (постгеморрагический лейкоцитоз вследствие гипоксемии);

11) гемолитический криз;

12) почечная колика;

13) аллергические реакции;

14) в ряде случаев – злокачественные новообразования, особенно при распаде опухолей.

Умеренный лейкоцитоз может быть при истинной полицитемии, при злокачественных лимфомах с поражением костного мозга, иногда при острых лейкозах, в начальных стадиях хронических лейкозов. Значительное повышение числа лейкоцитов (более 200 Г/л) имеет место при хроническом миелолейкозе и хроническом лимфолейкозе.

Снижение количества лейкоцитов – лейкопения. Причины лейкопений (В. А. Алмазов, 1981 г.):

1) недостаточность кроветворения в костном мозге (лейкопении центрального генеза) в результате гибели стволовых клеток (некоторые формы острого лейкоза, лучевая болезнь, метастазирование новообразований в костный мозг), жирового перерождения костного мозга (апластическая анемия) или развития соединительной ткани (хронический миелофиброз). К развитию лейкопений центрального генеза приводит воздействие ионизирующей радиации, бензола, прием некоторых лекарственных препаратов (производные пиразолона, нестероидные противовоспалительные препараты, антибиотики, особенно левомицетин, сульфаниламидные препараты, цитостатические средства и др.);