На этом принципе разработаны и некоторые другие методики, использующие этот вариант подтверждения аллергии типа III. Они основаны на том, что, входя в контакт с помеченными антигенами, нейтрофильные лейкоциты изменяют свою форму и увеличиваются в размерах. В крови замеряются и фиксируются точные размеры и форма нейтрофильных лейкоцитов. Это измерение считается нулевым. Затем забранную кровь добавляют в различные кюветы с экстрактами находящихся под подозрением продуктов питания. Если в крови содержатся специфические антитела, то они связываются с определенным продуктом и делают его составляющие видимыми для нейтрофилов, которые, в свою очередь, начинают разрушать аллергенный комплекс. При этом нейтрофилы изменяют размер и форму. Второй анализ крови сравнивается с нулевым. Значительная разница между измерениями считается подтверждением наличия аллергии на продукты питания типа III.

Теоретически такое заключение весьма логично, но все же существуют некоторые методические проблемы, которые могут привести к ложным результатам. Речь идет о так называемой функциональной составляющей, учитывающей специфику живых клеток.

Известно, что состав крови изменяется в зависимости от времени ее нахождения вне организма: нейтрофильные лейкоциты увеличиваются в размерах, меняя свою форму. Это может привести к утере точности замеров. Критическое время составляет примерно 6 ч, после чего клетки начинают изменяться. Спустя 24 ч результаты теста практически не репрезентативны. Таким образом, подобный тест возможен только со свежей кровью и не подходит для пересылки по почте.

Еще одной проблемой могут стать сопутствующая инфекция или медикаментозная терапия, влияющие на функции нейтрофильных лейкоцитов. При этом возможна как их гиперактивность, так и подавление активности. В обоих случаях результаты либо невозможно воспроизвести, либо они неверны. Таким образом, пациент должен быть здоровым и до теста как минимум неделю не принимать медикаменты. У хронических больных такой тест зачастую реализовать невозможно. С научной точки зрения этот метод удовлетворителен, однако практически имеет слишком много ограничений для того, чтобы получить точные результаты.

IgG-тестирование посредством ImuPro-теста

Главным фактором при аллергии типа III является специфический IgG, направленный на один из продуктов питания. Речь идет о выявлении определенного IgG, маркирующего антиген и делающего его узнаваемым для фагоцитов.

Если у пациента есть аллергия типа III, то в его кровообращении находятся специфические IgG против соответствующего продукта. Сам по себе IgG не делает больным, и лишь с момента употребления продукта запускается защитная реакция. Поэтому IgG — идеальный маркер для этого типа аллергии, находящийся в крови в достаточном количестве.

В сравнении с вышеописанным тестом, в данном определении наличия аллергии типа III IgG стоит на ступень выше в шкале реакций. IgG абсолютно необходим для активизации нейтрофильных лейкоцитов. Он очень стабилен и может храниться без охлаждения неделю, не искажая результат. В этом случае забранная для анализа кровь может быть даже отправлена по почте.

Поскольку функциональная составляющая в данном случае не играет роли, искажения и нарушения, вызванные сопутствующими инфекциями или приемом медикаментов, отсутствуют. Так как период полураспада IgG составляет примерно 3 недели, тест может проводиться и у пациентов, находящихся на иммуноподавляющей терапии, в случае, если она длится не более трех недель.

В качестве ограничений для определения IgG следует назвать гаммапатию, то есть неспособность к образованию антител, и так называемую моноклональную гаммапатию — болезнь, при которой вырабатываются строго определенные формы IgG-антител. При наличии одной из этих болезней тестирование нецелесообразно, так как в большинстве случаев реакция организма отсутствует.

Фактором, способным влиять на качество результатов, является и способ забора крови для анализа. Предпочтение отдается забору из вены, при котором можно получить достаточное количество крови. Менее эффективен способ взятия крови из пальца, при котором количество крови ограничено. Кроме того, при давлении на палец выжимается какое-то количество клеточной жидкости, так что концентрация IgG значительно колеблется от одного анализа к другому и влияет на качество результатов.

Итак, при выборе метода подтверждения аллергии типа III тест на наличие определенных IgG является более стабильным и надежным, чем тест на процесс активирования нейтрофилов. При ImuPro-тесте можно не опасаться неточностей из-за сопутствующих инфекций или действия медикаментов, а кровь может быть отправлена для анализа и по почте.

Порядок проведения тестирования

Тестирование для подтверждения наличия IgG-антител называется ELISA (Иммуноферментный анализ, сокращенно ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay). Это надежный иммунологический метод, применяемый и для определения других антител.

В нашем случае антиген — богатый протеином экстракт продукта питания, находящийся в каверне, подсоединяется к тестовой пробирке из пластика. Каждый продукт помещается в отдельную лунку. Из практических соображений используют так называемые микротитровальные пластиковые планшеты с 96 лунками. В 5 лунках, предназначеных для стандартного сравнения, находятся калибровочные растворы, с помощью которых может быть определена концентрация IgG. Определенное количество предварительно обработанной и разбавленной сыворотки крови пациента добавляется во все лунки, содержащие экстракты продуктов питания.

Если в крови пациента содержатся антитела против продуктов питания, они прикрепляются к тем продуктам питания, против которых они направлены. По истечении инкубационного времени (время между контактом и реакцией) планшеты промываются, и жидкость, находящаяся в них, удаляется. В лунках остаются прикрепленные к ним антитела. Затем добавляют второе антитело, в этот раз в каждую лунку со стандартным раствором. Оно способно распознавать только IgG-антитела человека, прикрепляясь только к IgG, соединенные с продуктами питания, и к стандартному раствору. Непомеченные продукты питания в этот раз уже не используются, а исследуемое антитело маркируется энзимом. По истечении определенного времени снова удаляют жидкость и моют планшеты. В конечном итоге остается лишь комплекс из продуктов, IgG-антител крови и маркированных IgG-антител в лунках.

Чтобы сделать эти комплексы видимыми, примешивают особый индикатор, реагирующий с энзимами маркированного антитела, которое под действием этого индикатора меняет цвет. Интенсивность цвета пропорциональна количеству образованного комплекса, который в свою очередь пропорционален содержащемуся в крови количеству IgG против соответствующих продуктов питания. С помощью калибровочной кривой можно высчитать точную концентрацию каждого специфического IgG. Посредством добавления стоп-раствора реакция останавливается и стабилизируется. В заключение содержимое планшеты измеряется с помощью разработанного специально для этой цели лазерного прибора.

Для проведения теста ImuPro300 используются 3 планшеты на каждого пациента, что соответствует 1152 каплям из пипетки. Так, в течение дня один техник-лаборант способен произвести только 20 проб.