Развернуто представлены аспекты исследования крови в известном «Пособнике» профессора Н. А. Облонского, вышедшем в 1894 г. Это издание пользовалось большим авторитетом среди судебных медиков и носило характер практического руководства. К сожалению, данное руководство быстро стало библиографической редкостью. В «Пособнике» говорится об описании внешних признаков пятен крови, приводится морфологический и спектральный методы установления наличия крови, сообщается об отличии следов, возникших при раздавливании насекомых, от ржавчины и красок. Спектральные пробы рекомендуются на оксигемоглобин, метгемоглобин в старых пятнах. Есть упоминание и о восстановленном гематине.

Кровь, подвергшуюся действию высокой температуры, по мнению автора, следует исследовать на спектр гематопорфирина при помощи предварительной обработки концентрированной серной кислотой. Глава, посвященная крови, в «Пособнике» Н. А. Облонского состоит из 18 страниц и указывает на хорошую эрудицию и большой опыт автора.

Среди многих работ в области судебной медицины, вышедших с кафедры Военно-медицинской академии за два последних десятилетия XIX столетия, найдена только одна судебно-медицинская работа Д. П. Косоротова (1889), в которой автор выходит за пределы исследования пятен и расширяет спектр применения обычных проб на кровь.

В 1891 г. профессора И. М. Сорокина сменил Н. П. Ивановский, имевший многолетний опыт чиновника – эксперта Медицинского департамента. Несмотря на то что Н. П. Ивановский прекрасно разбирался в вопросах судебно-медицинского исследования крови, среди научных работ, изданных за время его заведования кафедрой (1891–1889), нет ни одной чисто судебно-гематологической работы. Но все же профессор Н. П. Ивановский вопросам гематологии уделял большое внимание в своей практической деятельности, которая отразилась даже в литературе – в рассказе А. П. Чехова и учебной работе.

По свидетельству А. К. Европина: «При лекциях об исследовании различных подозрительных пятен весьма подробно обращалось внимание на исследование таковых химико-микроскопически и спектроскопически».

В Императорском Московском университете при профессоре И. И. Нейдинге, сменившем Д. Е. Мина в 1878 г. и занимавшем кафедру до 1900 г., работ по исследованию вещественных доказательств не велось. Все началось только с очень известной диссертации П. А. Минакова о волосах (1894) и продолжалось рядом работ по лабораторным вопросам изучения крови. Первая работа судебно-гематологического характера принадлежит также П. А. Минакову, но касается не пятен крови, а изучению влияния формальдегида на гемоглобин, кроме того, в этой работе впервые приводится предположение о нейтральном гематине.

В 1897 г. вышла небольшая, но выдающаяся работа П. А. Минакова «О действии на кровь и гемоглобин формалина и алкоголя». Эта работа была опубликована на русском языке в «Медицинском обозрении» (1897). В ней П. А. Минаков приводит результаты своих химических и спектроскопических исследований крови, измененной под влиянием алкоголя и формалина. Работа эта была вызвана известным открытием Н. Ф. Мельникова-Разведенкова нового способа консервирования патолого-анатомических препаратов с сохранением их натурального цвета при помощи формалина и спирта.

П. А. Минаков обратил внимание, что цвет крови в патолого-анатомических препаратах не вполне натуральный, а имеет кирпичный оттенок. Данный факт зависит, по исследованиям П. А. Минакова, от того, что под влиянием формалина и спирта гемоглобин переходит в нейтральный гематин, не растворимый в воде и спирте и дающий особый спектр, до того времени никем не наблюдавшийся. С этой же точки зрения П. А. Минаков объяснил ошибки, встречающиеся при изготовлении препаратов по способу Н. Ф. Мельникова-Разведенкова. Сделанное П. А. Минаковым открытие нейтрального гематина и его спектра составило важный новый факт в науке. Два года спустя Арнольд описал спектр нейтрального гематина, идентичный открытому П. А. Минаковым.

Для установления присутствия крови в следах на вещественных доказательствах методы делятся на ориентировочные и доказательные.

К наиболее часто используемым в настоящее время ориентировочным методам относят реакцию с реактивом Воскобойникова (с бензидином). Марлевый или ватный тампон смачивают смесью, состоящей из 1 процентного спиртового раствора основного бензидина и 5 процентного раствора перекиси водорода, и прикладывают к пятну, похожему на кровь. В случае наличия крови реактив на вате (марле) в месте соприкосновения приобретает синий цвет.

Для установления присутствия крови в следах на различных загрязненных предметах, больших по объему (ковры, половики и т. п.), особенно когда они располагаются в менее освещенных участках места происшествия, используют реакцию хемилюминесценции. В 1 л дистиллированной воды вносят 0,1 г люминола и 0,5 г гидрокарбоната натрия. Перед использованием к раствору добавляют пергидроль из расчета 10 мл на 1 л раствора. Подозрительные участки опрыскивают из пульверизатора. При положительном результате наблюдают вспышку голубого цвета в течение 65 с и образование белой пены.

Из доказательных методов кровяного происхождения следа для хорошо выраженных пятен применяют (по выбору) метод микроспектроскопии или (чаще всего) метод тонкослойной хроматографии на различных сорбентах, для чего кусочек из следа экстрагируют в физиологическом растворе, затем наносят подготовленный материал на сорбент в 5–7 мм от левого края пластинки, которую подсушивают при комнатной температуре. На образовавшееся пятно наносят вторую каплю, подсушивают – и так до израсходования 1–2 мкл вытяжки. Таким же образом на пластинку наносят свидетель (заведомо известную кровь). Пластинку помещают на 15 мин в сушильный шкаф при 100 градусах С, затем в чашку Петри наливают растворитель и пластинку кладут на подставку так, чтобы фитиль достиг дна чашки, накрывают крышкой и разделение ведут обычно 7–10 мин. Далее пластинку вынимают из камеры, высушивают и опрыскивают верхнюю треть раствором бензидина. Спустя 3–5 мин производят опрыскивание части пластинки раствором перекиси водорода. Образование на хроматограмме недалеко от фронта зоны синего цвета говорит о наличии гемоглобина, которое доказывают, сопоставляя эту зону с зоной свидетеля.

Старые, замытые пятна исследуют следующим образом: из пятна на предмете-носителе берут волокно или делают соскоб, помещают на предметное стекло и добавляют 2–3 капли концентрированной серной кислоты, накрывают предметным стеклом и исследуют довольно чувствительным методом микролюминесценции. Под действием серной кислоты красящее вещество крови образует глыбки гематопорфирина, имеющие яркое пурпурно-красное свечение. Такие участки исследуют с помощью микроспектральной насадки для установления спектра гематопорфирина.

Установив кровь, приступают к следующему этапу исследования – определению видовой принадлежности крови. К основным, постоянно используемым методам в практике относятся метод кольцепреципитации в жидкой среде и метод встречного иммуноэлектрофореза (электропреципитации).

Подготовка объектов для обоих методов практически идентична. Пятна крови на вещественных доказательствах и контрольные участки предметов-носителей экстрагируют стерильным физиологическим раствором при температуре +4–6 °C в течение 18–72 часов. При изучении труднорастворимых пятен крови время экстрагирования продлевают до 4–5 суток. Белки в пятнах из следов крови или другого объекта доводят до приблизительного содержания 1:1000 под контролем пробы Геллера с азотной кислотой.